目前PCR實(shí)驗(yàn)室建設(shè)要求至少應(yīng)該分為三個(gè)區(qū)域,即試劑準(zhǔn)備區(qū)、核酸制備區(qū)和PCR擴(kuò)增區(qū)。如果要對擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行開放性鑒定,如雜交、電泳等操作,原則上需要增加第四個(gè)區(qū)。實(shí)驗(yàn)室分區(qū)的主要目的是避免純化核酸和擴(kuò)增產(chǎn)物逆向污染前一個(gè)區(qū)域。但多年的經(jīng)驗(yàn)表明,無論是三區(qū)還是四區(qū)的設(shè)置,似乎都沒有完全杜絕實(shí)驗(yàn)室污染的發(fā)生。那么PCR實(shí)驗(yàn)室究競應(yīng)如何建設(shè)才能有利于污染的預(yù)防和有效清除?
其實(shí)污染就是PCR擴(kuò)增管中摻入了原來樣本不存在的擴(kuò)增核酸,那么這個(gè)不受歡迎的核酸是怎么來到PCR擴(kuò)增管里的?如果排除試劑盒、儀器和人員操作等環(huán)節(jié),核酸氣溶膠和灑落的樣本與核酸的清除是實(shí)驗(yàn)室建設(shè)應(yīng)該重點(diǎn)考慮的環(huán)節(jié)。
實(shí)驗(yàn)室的建設(shè)首先要有通風(fēng)設(shè)置,通風(fēng)是PCR實(shí)驗(yàn)室建設(shè)應(yīng)該考慮的基本條件,如果采用封閉彩鋼板建設(shè)的實(shí)驗(yàn)室,應(yīng)進(jìn)行壓差設(shè)置，即自試劑準(zhǔn)備室、核酸制備室到擴(kuò)增室依次呈負(fù)壓,但清潔新風(fēng)應(yīng)從室外引進(jìn),新風(fēng)過濾網(wǎng)應(yīng)定期更換,否則便會成為污染的來源。其次是實(shí)驗(yàn)室墻面和地面具有防水功能,也就是墻面和地面可以水洗。每個(gè)房間設(shè)置地漏,方便“實(shí)驗(yàn)室的清潔”， 當(dāng)實(shí)驗(yàn)室污染發(fā)生時(shí),即可使用“水洗實(shí)驗(yàn)室”的方法有效清除污染,清除過程使用的是0.29%有效氨溶液,它不但有效斷裂核酸片段,而且還具有淬滅熒光基團(tuán),有利于PCR實(shí)驗(yàn)室熒光本底的去除。但過量使用反而會影響試劑擴(kuò)增效率。消毒液清洗后應(yīng)該使用自來水或清潔水進(jìn)行再次清洗,特別是設(shè)備表面。實(shí)驗(yàn)室空氣中的污染清除,可以用有效氨溶液進(jìn)行噴霧。
總之，PCR實(shí)驗(yàn)室過度分區(qū)和分割,不但浪費(fèi)空間,影響人員操作,常常不利于污染物的擴(kuò)散和清除。相信在不久的將來,隨著試劑盒技術(shù)的發(fā)展,一個(gè)房間可實(shí)現(xiàn)PCR的試劑準(zhǔn)備、核酸純化和PCR打增的所有功能，而污染的預(yù)防和清除也會顯得十分簡單。
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